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偏光显微镜在中药显微鉴定中的应用

日期:2019-05-20 11:30:01

国产亚洲视频在线播放,免费国产亚洲视频在线播放,久久超级碰碰视频,超级碰碰视频在线观看  近年来,利用其观察特定目标显微组织快速准确的特点而得到关注,被越来越多地应用到中药显微鉴定中,可明显提高显微鉴别的效率和准确率。本研究选取了50余种具有代表性的中药材和对照药材粉末进行了系统研究,在显微镜正常光和偏光状态下对比观察不同性质的植物细胞壁及细胞内含物、部分动物药和矿物药的显微组织特征,采用数码成像系统拍摄,以期为在中药显微鉴定中的应用提供依据。

 

 

  中药显微鉴定是利用显微镜观察植(动)物药材内部的细胞、组织构造及细胞内含物,明确其显微特征,从而达到鉴别目的的一种鉴定方法,是中药四大传统鉴定方法之一,具有简便、经济,并适用于破碎、粉末中药的特点。1977年版《中国药典》首次规定了药材显微鉴定,之后显微鉴定被广泛应用于药材和中成药的鉴定,2010年版《中国药典》收载的显微鉴别更是达到2140项。然而随着显微鉴定被广泛列入中药材、中成药的鉴别项下,显微鉴定又需要操作者具备丰富的理论知识和实践经验,使得显微鉴定成为检验人员的负担。

 

 

  观察方法

  1.1不同性质植物细胞壁偏光现象的观察 传统显微鉴定的研究中,判断植物细胞壁性质是利用显微化学反应将目标组织染色进行。由于染色操作复杂,一次染色只能观察一种类型细胞壁,染色法基本只用于教学和科研,不适用于日常检验。目前日常检验的方法是将药材粉末制成水合氯醛透化片,在显微镜正常光下寻找目标组织,再利用数码成像系统拍摄。新的偏光显微技术方法也是将药材粉末制成水合氯醛透化片,不同之处是在显微镜偏光下观察,再利用数码成像系统拍摄。水合氯醛透化片制片方法:取挖耳勺1勺药材粉末置于载玻片一端,滴加2~3滴水合氯醛试液,将载玻片载药材粉末一端置于酒精灯 内焰处受热至微沸,立刻移至室温处,待沸腾现象消失继续受热,反复微沸3次,即透化完全,冷却,盖盖玻片,制片完成。植物细胞壁的性质包括木质化、木栓化、角质化细胞壁及纤维素细胞壁 。以下药材粉末制成水合氯醛透化片后分别在正常光和偏光下对不同性质植物细胞壁进行对比观察。

 

  1.1.1木质化细胞壁 分别选择黄芪、甘草、浙贝母、干姜、川木通、川牛膝、大血藤、天花粉、化橘红、白薇 、桔梗的导管,黄芪、甘草、干姜、川木通、川牛膝、白薇、苍术、枇杷叶的纤维,黄芪、诃子、天冬、大血藤、川木通 、马钱子、天花粉 、白薇、苍术的石细胞,唐古特大黄、掌叶大黄的非木质化导管,诃子、车前草、薄荷的腺毛,诃子、马钱子、车前草、芫 花、穿心莲、化橘红、桑叶的非腺毛作为观察对象,将各药材粉末制成水合氯醛透化片后分别在显微镜的正常光和偏光下观察。

  1.1.2木栓化或角质化细胞壁 选择甘草、唐古特大黄、掌叶大黄、麻黄、川木通、川牛膝、大血藤、苍术、桔梗木栓细胞或角质层为观察对象,按上述方法进行观察。

  1.1.3纤维素细胞壁 选择麻黄、干姜、川牛膝、天麻、化橘红、苍术、枇杷叶、桔梗的纤维素薄壁细胞壁为观察对象,按上述方法进行观察。

 

  1.2 植物细胞内含物偏光现象的观察

  1.2.1 淀粉粒 观察淀粉粒的制片方法与其他组织不同,是将药材粉末制成水装片进行观察。水装片制作方法:取挖耳勺 1勺药材粉末置于载玻片一 端,滴加 2—3滴蒸馏水,盖盖玻片,制片完成。选择浙贝母、川贝母、黄芪、唐古特大黄、掌叶大黄、干姜、天花粉、白薇、粉萆薜淀粉粒为观察对象,将各药材粉末制成水装片后分别在显微镜的正常光和偏光下观察。

  1.2.2 草酸钙结晶 选择萑草、红花、唐古特大黄、掌叶大黄、白薇、枇杷叶、颠茄草、桑叶草酸钙簇晶,山药、天冬、天麻、苍术 、粉萆薜、商陆草酸钙针晶,甘草、麻黄、川牛膝、大血藤 、化橘红、白薇、枇杷叶草酸钙方晶,牛膝、麻黄、山茱萸、川牛膝、颠茄草草酸钙砂晶为观察对象,将各药材粉末制成水合氯醛透化片后进行观察。

  1.2.3 钟乳体 选择穿心莲、桑叶钟乳体为观察对象,将各药材粉末制成水合氯醛透化片后进行观察。

  1.2.4 分泌组织 选择诃子、干姜、益智的油细胞和西洋参的树脂道作为观察对象,将各药材粉末制成水合氯醛透化片后进行观察。

  1.2.5 菊糖结晶 选择桔梗、木香、苍术、白术菊糖结晶为观察对象,取各药材粉末分别加70%乙醇浸泡24h,取浸泡后粉末制成水装片后进行观察。

  1.2.6 黏液细胞 选择罗勒子、南葶苈子、胖大海、石斛 、铁皮石斛黏液细胞为观察对象,将各药材粉末制成水合氯醛透化片后进行观察。

  1.2.7 硅质块 选择石斛、铁皮石斛、益智、砂仁硅质块为观察对象,将各药材粉末制成水合氯醛透化片后分别在显微镜的正常光和偏光下观察。

 

  1.3 动物药偏光现象的观察国产亚洲视频在线播放,免费国产亚洲视频在线播放,久久超级碰碰视频,超级碰碰视频在线观看 动物毛发是由角蛋白组成,不同动物的毛发角蛋白性质和排列方式不同,因此在偏光下皮肤干涉色、髓腔指数和髓腔内部构造不同,显示不同色彩和亮度,利用此性质可对涉及毛发的动物类中药进行鉴别。动物骨、齿的磨片在偏光下有强烈的颜色和条纹对 比,可利用偏光显微镜对动物骨、齿进行鉴别。 选择正品一等海珠和全蝎刚毛为观察对象,将各药材粉末制成水合氯醛透化片后分别在显微镜的正常光和偏光下观察。

 

  1.4 矿物药偏光现象的观察国产亚洲视频在线播放,免费国产亚洲视频在线播放,久久超级碰碰视频,超级碰碰视频在线观看 自然界的绝大部分矿物是由结晶质组成,有明显偏光现象,不同晶形的矿物在偏光下有不同形状和色彩,因此可利用偏光显微镜对矿物药进行鉴别。选择金礞石、朱砂、雄黄为观察对象,将各药材粉末制成水合氯醛透化片后分别在显微镜的正常光和偏光下观察。

 

 

  结果与讨论

  用于检测具有双折性的物质,它与正常光显微镜不同之处在于其光源前有偏振片(起偏振器),使进入显微镜的光线为偏振光,镜筒中装有另一偏振片(检偏振器,一个偏振方向与起偏振器垂直的起偏振器);偏光显微镜的载物台可以旋转,当载物台上放人单折射的物质时,无论如何旋转载物台,由于两个偏振光是垂直的,显微镜里看不到光线,而放入双折射性物质时,由于光线通过这类物质时发生偏转,因此旋转载物台便能检测到这种物体;显微观察时有偏光现象的显微特征在暗视野下犹如黑夜里的星星,可以被快速准确观察到,因此可以提高显微鉴别的效率和准确率。本研究系统对比观察研究了50余种植物药不同性质的细胞壁及细胞内含物、动物药和矿物药在正常光和偏光显微镜下的偏光现象,结果见表1和图1。结果提示,木质化细胞壁如木质化的导管、纤维、石细胞具有强烈偏光现象,偏光镜下具有特殊的彩色光泽,亮度与木化程度成正比;木栓化或角质化细胞壁及纤维素细胞壁,在暗视野中无偏光现象,但在起偏振器和检偏振器非正交状态下有微弱偏光现象 。细小淀粉粒在普通显微镜下与细小的油滴或糊粉粒等不易区别,特别是在大处方中成药显微鉴定时即使用碘试液染色后观察也易受其他有色显微组织碎片的干扰,而在偏光显微镜下淀粉粒清晰可见 ,脐点处呈十字交叉形,染色后偏光现象依然存在,但加热糊化后偏光现象消失,检查淀粉粒时可利用该性质在暗视野下排除其他不具有偏光现象易混物质的干扰,在大处方中成药的显微鉴定时,利用淀粉粒偏光现象不需染色即可快速发现细小的或散在植物组织中的少量淀粉粒。草酸钙结晶在偏光下均具有明显的偏光现象。碳酸钙结晶因晶体排列不同出现不同的偏光现象,晶型排列整齐的碳酸钙结晶无偏光现象或仅有微弱偏光现象,晶型排列没有次序的碳酸钙结晶则会呈现出不同鲜艳色彩,如图1中穿心莲1钟乳体有明显偏光现象,而穿心莲2钟乳体则偏光现象不明显,只有微弱的偏光现象。分泌组织 (脂肪油、挥发油、树脂)、菊糖结晶、黏液细胞、硅质块无偏光现象或仅有弱偏光现象。动物毛发、齿骨具有明显的偏光现象。矿物药因其大多为结晶矿物,具有明显偏光现象,利用偏光显微镜对硅化合物类、钙化合物类、铁、砷化合物类、钠盐类、汞化合物类等34种常用矿物药进行了显微鉴定。本研究中朱砂极细粉在正常光下显鲜红色或暗红色,在中成药制剂中极易与其中的成分混淆,但偏光下呈鲜红色并带光泽,易于检出。雄黄粉末在正常光显微镜下呈橙黄色,无光泽,在中成药制剂中易与树脂道或其他黄色物质混淆,偏光下断面显彩色光泽,易于检出。

 

  随着生活水平的提高,中药不仅在治病方面发挥了独特的功效,而且在药膳食疗中得到了广泛的应用。但中药成分复杂、来源广泛,如何鉴定真伪至关重要。偏光显微镜在中药材和中成药检测中可快速找到有偏光的显微组织,特别是将偏光显微技术引入大处方中成药的显微鉴定中能快速排除无偏光现象干扰物,准确找到有偏光现象的目标物。今后,如能扩大偏光显微镜在中药材、中成药显微鉴别中应用的普及率,将给检验工作带来极大的便利。